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答案

B

解析

基因分離定律的實質是：減數分裂形成配子時，等位基因隨著同源染色體的分開而分離，進入不同的配子中去。如：當F1基因型為Dd時，減數分裂形成D和d兩種配子，且比例為1∶1。

F2表現型的比為3：1，屬于性狀分離，不能說明分離定律的實質，A錯誤；F1在減數分裂形成配子時，等位基因隨著同源染色體的分開而分離，產生配子的比為1：1，屬于分離定律的實質，B正確；F2基因型的比為1：2：1，是產生的配子隨機結合形成的，屬于結果而不是實質，C錯誤；測交后代比為1：1，是對分離定律的驗證，不是說明基因分離定律實質的，D錯誤。

故選B。

擴展知識

基因分離定律內容：在生物的體細胞中，控制同一性狀的遺傳因子成對存在，不相融合；在形成配子時，成對的遺傳因子發生分離，分離后的遺傳因子分別進入不同的配子中，隨配子遺傳給后代。

基因分離定律的實質是在減數分裂產生配子的過程中，成對的遺傳因子彼此分離。